丙酮酸(PA)含量檢測試劑盒

丙酮酸(PA)含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法

注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。
貨號：BC2200
規格：50T/48S

產品內容：
提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體9mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：液體50mL×1 瓶， 4℃保存；
丙酮酸鈉標準液，1mg/mL：液體1mL×1瓶， 4℃保存。

產品說明：
丙酮酸通過乙酰CoA 連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝，起著重要的樞紐作用。
丙酮酸與2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在堿性溶液中呈櫻紅色。

需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。

操作步驟：
一、丙酮酸提取：
1、 細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104 個）：提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬細菌或細胞加入1mL 提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30 次），靜置30min，8000g，常溫離心10min，取上清待測。
2、 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿，靜置30min，8000g，常溫離心10min，取上清待測。
3、 血清（漿）樣品：按照血清（漿）體積（mL）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議取0.1mL血清（漿）加入1mL 提取液），進行冰浴勻漿，靜置30min，8000g，常溫離心10min，取上清待測。
4、 標準品的準備：將標準品用蒸餾水稀釋100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0?g/ml。

二、測定步驟：
1、 分光光度計預熱30min 以上，調節波長520nm，蒸餾水調零。
2、 取300μL標準品或樣本+100μL 試劑一于1.5mL EP 管中，混勻，靜置2min，加入500μL 試劑二，混勻，于520nm 波長處測定吸光值A。
三、丙酮酸含量計算：
1、 根據標準品濃度和測定值建立標準曲線；y為丙酮酸鈉含量（μg/mL），x為吸光值。
2、 按照血清（漿）體積計算
丙酮酸含量（μg/mL）= (y×V1)÷（V3×V1÷V2）=y×10
3、 按照蛋白濃度計算
丙酮酸含量（μg/mg prot）=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr
4、 按照樣品質量計算
丙酮酸含量（μg/g 鮮重）= (y×V1)÷(W ×V1÷V2）=y÷W
5、 按照細菌或細胞密度計算
丙酮酸含量（μg/104 cell）＝(y×V1)÷（500×V1÷V2）= y÷500

V1：加入反應體系中樣本體積，0.3mL；
V2：加入提取液體積，1 mL；
V3：加入血清（漿）體積，0.1 mL；
Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；
W：樣本質量，g；
500：細菌或細胞總數，500 萬。

相關文獻：

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu， Pengsong Li，Lei Zhang， Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影響因子:3.67 PMID:30673809
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影響因子: PMID:30453281