檸檬酸(CA)含量檢測試劑盒

產品名稱:：  檸檬酸(CA)含量檢測試劑盒

產品英文名: Citric Acid(CA) Content Assay Kit

產品貨號：BC2150               產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：50管/48樣             產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：630
庫存狀態：現貨                          
關鍵字:：      檸檬酸檢測試劑盒|CA檢測試劑盒|檸檬酸|試劑盒

簡要介紹：
    CA是生物體內常見的有機酸，是重要的食品風味物質。此外，CA是三羧酸循環1步反應的產物。
    酸性條件下，檸檬酸還原Cr⁶⁺生成Cr³⁺，在545nm處有特征吸收峰；通過測定545nm吸光值的增加，即可計算出樣品中檸檬酸含量。


產品詳細描述
產品內容：
試劑一：液體90mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體0.1mL×1支，－20℃保存。
試劑四：粉劑×1瓶，室溫保存。臨用前配制，加入5mL試劑一，充分溶解。
試劑五：液體5mL×1瓶，4℃避光保存。
標準品：液體1mL×1支，1mmol/L檸檬酸標準液，4℃保存；臨用前稀釋成250μmol/L檸檬酸標準液。
產品說明：
    CA是生物體內常見的有機酸，是重要的食品風味物質。此外，CA是三羧酸循環第1步反應的產物。
    酸性條件下，檸檬酸還原Cr⁶⁺生成Cr³⁺，在545nm處有特征吸收峰；通過測定545nm吸光值的增加，即可計算出樣品中檸檬酸含量。

試驗所需自備儀器和樣品：
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍、1mL比色皿和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品中檸檬酸提取：

1. 液體樣品中檸檬酸提取：取0.1mL液體加試劑一0.9mL，充分混勻，11000g/min 4℃離心10min，取上清液，待測。
2. 組織中檸檬酸提取：稱約0.1g組織，加入1mL試劑一，冰上充分研磨，11000g/min 4℃離心10min，取上清液，待測。
3. 線粒體中檸檬酸提取：稱約0.1g組織，加入1mL試劑一，冰上充分研磨，600g/min，4℃離心5min；取上清另一EP管中，11000g/min，4℃離心10min，棄上清（此上清液可用于細胞質CA含量測定）；向沉淀中加試劑二200μL，以及試劑三2μL，充分懸浮溶解，11000g/min，4℃離心10min，取上清液，待測。

二、測定：
1. 分光光度計預熱30 min以上，調節波長到545 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑一置于30℃水浴中預熱30min以上。
3. 按下表在1.5mLEP管中加入相應試劑
 

三、檸檬酸含量計算：

1. 按液體樣品的體積計算：

檸檬酸含量（mmol/L）=[C標準液×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×樣品稀釋倍數×V總=2.5×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)
    C標準液：250μmol/L=0.25 m mol/L；樣品稀釋倍數：（0.1 mL樣品+0.9mL試劑一）÷0.1 mL樣品=10；V總：1 L。
2. 按組織鮮重計算：
檸檬酸含量（μ mol/g FW）=[C標準液×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×V總÷W
                        = 0.25×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管) ÷W
    C標準液：250 μ mol/L；V總：上清液總體積，1.0 mL=0.001 L；W：樣品質量，g。

3. 按線粒體蛋白含量計算：

檸檬酸含量（μ mol/mg prot）=[C標準液×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]÷Cpr
                          =0.25×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管) ÷Cpr
    C標準液：250 μ mol/L=0.25μ mol/mL；Cpr：上清液蛋白質含量，mg/mL。
注意事項：
1. 樣品處理等過程均需要在冰上進行。
2. 試劑五為易致癌物質，實驗過程中，需佩戴手套，避免試劑五濺到皮膚上。
3. 檸檬酸提取液不能用于蛋白含量測定，如需測定蛋白含量，需另取組織，使用本公司BCA試劑盒進行測定。
4. 若反應30min后有明顯的黑色小顆粒，屬于正常現象，需將樣本稀釋后再測。

相關文獻：
《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影響因子: PMID:30453281